治疗威尔逊氏病的特异性四齿铜螯合剂

本发明涉及威尔逊氏病领域。更具体地，本发明提供了治疗威尔逊氏病的方法。

背景技术：

1、威尔逊氏病(wd)是一种遗传性疾病，是由于编码铜载体蛋白的atp7b基因发生突变所致，该蛋白负责将肝脏中多余的铜排出体外。在世界上，这种常染色体隐性遗传的铜代谢紊乱病，每3万人中就有1人患病。atp7b蛋白将过量的铜从肝脏转运到胆汁，然后再转运到粪便。当这种载铜蛋白缺乏时，过量的铜就会释放到血液中，并通过尿液缓慢排出体外，从而产生铜离子积累，导致慢性肝炎和肝硬化。最后，大脑中会检测到过量的铜，从而导致神经系统疾病(a.lucena-valera等人，worldj.hepatol.，13(6)634-649,2021年)。如果不进行治疗，wd可导致死亡。

2、目前的治疗方法包括使用铜螯合剂来增加铜的排泄。目前，治疗wd的一线药物是d-青霉胺(dpa)，成人每天口服750-1500毫克。随着时间的推移，已经发现了dpa的一些不良反应：肾毒性、再生障碍、视网膜炎和神经功能衰退。

3、第二种用于治疗wd的药物是曲恩汀(三亚乙基四胺)，成人口服剂量为900至2700毫克/天。随着时间的推移，发现出现严重的不良反应：骨髓抑制、贫血、皮疹和出血性胃炎。

4、医药领域迫切需要特异性铜螯合剂，比dpa或曲恩汀以更低的剂量有效调节铜过载。dpa和曲恩汀的主要缺点是缺乏金属选择性，因为它们对铜和锌离子均具有相似的螯合能力。本研究组基于8-氨基喹啉骨架设计了一系列新型的四齿配体化合物并命名为tdmq，与锌等其他金属离子相比，它们对铜的选择性很高，已被确认为治疗阿尔茨海默病的候选药物(专利见y.liu等人，中国(gci)，2009年)。liu等人，中国(gdut-cnrs)，2016年5月27日，cn201610369550.x，专利号us10,807,957b2。2020年10月20日批准。加拿大，专利号3025406，2021年6月1日批准。日本，专利号6889825，2021年5月26日批准。欧洲，2024年1月10日批准，专利号ep3466931b1)。由于这些tdmq配体具有很高的生物利用度(l.huang等人，pharmaceutics,14,2691,2022)，我们决定评估它们作为治疗威尔逊氏病候选药物的活性。此外，由于这些tdmq配体对锌的亲和力很弱，应该指出的是这些分子与锌盐联合用药是，将具有良好的兼容性。锌盐也用于威尔逊氏病的治疗，以减少肠道对铜的吸收(见上文引述的a.lucena-valera等人)。

5、tdmq配体的化学合成已在上述专利中报道(文章见w.zhang等，chemmedchem，13，864-704，2018)。在各种tdmq配体中，tdmq20因其在ad模型小鼠中证明了合适药理特征而被选为最佳候选药物(见j.zhao等，acs chem.neurosci.)

6、tdmq化合物的通式

7、tdmq20:r＝5,7-二氯-,n＝m＝2。

技术实现思路

1、鉴于上述医药领域对威尔逊氏病治疗所需的更高效、副作用更小的铜螯合剂的需求，本发明涉及特异性的四齿铜螯合剂，通过口服途径对威尔逊病模型小鼠进行有效的体内治疗。

2、本发明涉及使用名为tdmq的四齿特异性铜螯合剂治疗威尔逊氏病。本发明提供的证据表明：与目前用于治疗威尔逊氏病的药物d-青霉胺(dpa)相比，tdmq20在较低剂量口服给药时具有更好的药理活性。

3、在改善正常/非病理性铜排泄途径方面，tdmq20优于d-青霉胺。

4、三种不同剂量的tdmq20治疗后，小鼠肝脏中的铜浓度随药物剂量的增加而降低，这表明tdmq20的药理作用具有剂量依赖性。在50毫克/千克/天的剂量下，tdmq20(tdmq-h)比200毫克/千克/天的d-青霉胺(dpa)更能有效降低肝脏中的铜浓度，而后者目前被认为是治疗wd的最佳方法之一。

5、与未接受治疗的wd小鼠或接受dpa(200毫克/千克/天)治疗的小鼠相比，接受tdmq20(25或50毫克/千克/天)治疗的小鼠粪便中的铜含量明显更高，这表明接受tdmq20治疗后，小鼠粪便中铜的排出量增加。tdmq20的这种作用具有剂量依赖性。

6、使用tdmq20治疗的wd小鼠血清中的铜浓度随着tdmq20剂量的增加而增加。tdmq20的最高剂量(tdmq20-h，50毫克/千克/天)与血清中最高的铜浓度相对应，证实了该药物从肝脏中提取铜的能力。用dpa(200毫克/千克/天)治疗的wd小鼠血清中的铜浓度与未治疗的wd小鼠相比并无明显升高，远远低于用tdmq20(50毫克/千克)治疗的小鼠血清中的铜浓度。wd小鼠尿液中的铜浓度明显高于对照组。使用50毫克/千克剂量的tdmq20治疗后，尿液中的铜浓度比wd小鼠明显增加了1.8倍，这表明尿液中铜的排泄情况得到了明显改善。

7、小鼠大脑中的铜浓度也进行了测量。数据显示，对照组小鼠和患有wd的小鼠脑中的铜浓度相似，而且无论使用何种剂量，使用tdmq20治疗的wd小鼠脑中的铜浓度都没有增加。由于wd患者经常出现神经系统疾病，因此tdmq20并不将铜带入大脑的研究结果非常重要。

8、测定治疗后的wd小鼠血清中铜蓝蛋白(cp)的浓度，cp中含有大部分的血铜。正如预期的那样，wd小鼠的cp显著低于对照小鼠。与wd小鼠相比，经25或50mg/kg(tdmq20-m和tdmq20-h)tdmq20治疗的小鼠中cp水平显著增加。cp水平与对照小鼠相当(25mg/kg)或高于对照小鼠(50mg/kg)。由于cp水平被认为是人类威尔逊氏病临床控制中的一个重要参数，tdmq20治疗后cp损伤的逆转证实了这种药物作为治疗威尔逊氏病候选药物的前景。

9、与对照组相比，wd小鼠治疗组的其他差异表达蛋白(deps)的筛选结果为p<0.05。与对照组相比，wd小鼠肝脏中有14种蛋白下调，而29种肝脏蛋白上调。在wd小鼠的血清中，有5种蛋白被下调，5种被上调。在接受25或50毫克/千克的tdmq20治疗后(分别为tdmq20-m组和tdmq20-h组)，所有这些血清和肝脏deps均恢复到正常值。

技术特征：

1.一种治疗威尔逊氏病的方法，包括施用有效量的化合物(i)；

2.根据权利要求1中的方法，其中n＝m＝2，r5＝r7＝cl，r6＝h是合成治疗威尔逊病药物的首选tdmq分子。

3.根据权利要求1所述的方法，用化合物(i)治疗威尔逊病，可显著降低肝脏中的铜浓度，并显著增加粪便和尿液中铜的排出量。

4.权利要求1的方法在使用化合物(i)治疗期间不会增加大脑中的铜浓度。

5.权利要求1的方法可将肝脏和血清蛋白逆转至正常水平。

6.根据权利要求1所述的方法，经化合物(i)治疗后，血清铜蓝蛋白水平可恢复到对照组的正常值。

7.根据权利要求1所述的治疗威尔逊氏病的方法，可以作为单一疗法，也可以作为联合用药治疗的一部分，包括与锌盐联合使用。

8.权利要求1或2所述化合物的治疗用途，其中药物包括tdmq系列的可接受盐。首选盐酸盐形式。

技术总结本发明提供了一种利用四齿铜螯合剂治疗威尔逊氏病的方法。TDMQ(结构式如式(I)所示)四齿铜螯合剂系列的特异性铜螯合剂对治疗威尔逊氏病小鼠模型非常高效。使用TDMQ20治疗后，TX小鼠肝脏中的铜浓度降低，粪便中的铜排泄量增加。这两种效应都具有剂量依赖性。用TDMQ20治疗TX小鼠模型动物所获得的药理学数据有力地支持了选择该配体作为治疗这种遗传疾病的候选药物。技术研发人员：刘艳,朱颖珊,唐莹,黄岚,安妮·罗伯特,伯纳德·莫涅受保护的技术使用者：广东工业大学技术研发日：技术公布日：2024/9/29