免疫细胞培养基和免疫细胞的培养方法与流程

本发明涉及生物，特别是涉及免疫细胞培养基和免疫细胞的培养方法。

背景技术：

1、免疫细胞是指参与免疫应答或与免疫应答相关的细胞。包括淋巴细胞、树突状细胞、单核/巨噬细胞、粒细胞、肥大细胞等。免疫细胞可以分为多种，在人体中各种免疫细胞担任着重要的角色。其中，cd3ak细胞是一种新型抗肿瘤免疫活性细胞，具有体外扩增能力强、体外存活时间长、细胞毒性活性高、分泌淋巴因子能力强和体内外抗肿瘤效果显著等优点，成为多细胞治疗当中不可缺少的组成部分。目前，常用aim-v培养基来培养cd3ak细胞。但采用aim-v培养基进行培养得到的cd3ak细胞等免疫细胞的存活率较低。

技术实现思路

1、基于此，本申请提供一种免疫细胞培养基，采用该免疫细胞培养基对免疫细胞进行培养，得到免疫细胞的存活率较高。

2、此外，还提供一种免疫细胞的培养方法。

3、一种免疫细胞培养基，其特征在于，包括细胞基础培养基、以及添加到所述细胞基础培养基中的活性组分，所述活性组分包括：花生四烯酸、β-巯基乙醇、白藜芦醇、银杏叶提取物、环糊精、丙氨酸-谷氨酰胺、l-抗败血酸，所述细胞基础培养基包括rpmi-1640培养基。

4、本研究发现细胞基础培养基例如rpmi-1640培养基不足以培养免疫细胞，尤其是cd3ak细胞。而本申请上述免疫细胞培养基中的各活性组分配合rpmi-1640培养基等细胞基础培养基，能够促进cd3ak细胞等免疫细胞生长，提高免疫细胞的存活率。经试验验证，采用含有上述免疫细胞培养基对pbmc进行培养得到的总细胞量明显高于aim-v培养基得到的总细胞。

5、在其中一些实施例中，所述活性组分还包括il-2、抗cd3单克隆抗体、抗cd28单克隆抗体。

6、在其中一些实施例中，所述环糊精为β-环糊精。

7、在其中一些实施例中，所述活性组分以所述免疫细胞培养基中的终浓度计包括500u/ml～1000u/ml的il-2、2ng/ml～20ng/ml的抗cd3单克隆抗体、2ng/ml～20ng/ml的抗cd28单克隆抗体、1μm～10μm的花生四烯酸、1μm～10μm的β-巯基乙醇、1μm～10μm的白藜芦醇、1μm～10μm的银杏叶提取物、1μg/ml～10μg/ml的环糊精、1mm～10mm的丙氨酸-谷氨酰胺、1μg/ml～10μg/ml的l-抗败血酸。

8、在其中一些实施例中，所述活性组分以所述免疫细胞培养基中的终浓度计包括700u/ml的il-2、20ng/ml的抗cd3单克隆抗体、20ng/ml的抗cd28单克隆抗体、4μm的花生四烯酸、5μm的β-巯基乙醇、6μm的白藜芦醇、3μm的银杏叶提取物、5μg/ml的环糊精、2mm的丙氨酸-谷氨酰胺、5μg/ml的l-抗败血酸。

9、在其中一些实施例中，所述免疫细胞培养基由rpmi-1640培养基和所述活性组分构成，所述活性组分由如下组分构成：花生四烯酸、β-巯基乙醇、白藜芦醇、银杏叶提取物、环糊精、丙氨酸-谷氨酰胺、l-抗败血酸、il-2、抗cd3单克隆抗体、抗cd28单克隆抗体。

10、上述免疫细胞培养基在制备免疫细胞及/或免疫细胞外泌体中的应用。

11、在其中一些实施例中，所述免疫细胞包括cd3ak细胞。

12、一种免疫细胞的培养方法，包括如下步骤：采用上述免疫细胞培养基对血液单核细胞进行培养，得到免疫细胞。

13、在其中一些实施例中，采用所述免疫细胞培养基对所述血液单核细胞进行培养的步骤包括：将所述血液单核细胞接种至所述免疫细胞培养基中培养，培养过程中每隔2-3天补充一次所述免疫细胞培养基和血浆。

14、在其中一些实施例中，培养时间为14天，第0-5天的培养过程中每次补充所述血浆的量为10％(v/v)，第5-14天的培养过程中每次补充所述血浆的量为5％(v/v)。

技术特征：

1.一种免疫细胞培养基，其特征在于，包括细胞基础培养基、以及添加到所述细胞基础培养基中的活性组分，所述活性组分包括：花生四烯酸、β-巯基乙醇、白藜芦醇、银杏叶提取物、环糊精、丙氨酸-谷氨酰胺、l-抗败血酸，所述细胞基础培养基包括rpmi-1640培养基。

2.根据权利要求1所述的免疫细胞培养基，其特征在于，所述活性组分还包括il-2、抗cd3单克隆抗体、抗cd28单克隆抗体。

3.根据权利要求2所述的免疫细胞培养基，其特征在于，所述活性组分以所述免疫细胞培养基中的终浓度计包括500u/ml～1000u/ml的il-2、2ng/ml～20ng/ml的抗cd3单克隆抗体、2ng/ml～20ng/ml的抗cd28单克隆抗体、1μm～10μm的花生四烯酸、1μm～10μm的β-巯基乙醇、1μm～10μm的白藜芦醇、1μm～10μm的银杏叶提取物、1μg/ml～10μg/ml的环糊精、1mm～10mm的丙氨酸-谷氨酰胺、1μg/ml～10μg/ml的l-抗败血酸。

4.根据权利要求3所述的免疫细胞培养基，其特征在于，所述活性组分以所述免疫细胞培养基中的终浓度计包括700u/ml的il-2、20ng/ml的抗cd3单克隆抗体、20ng/ml的抗cd28单克隆抗体、4μm的花生四烯酸、5μm的β-巯基乙醇、6μm的白藜芦醇、3μm的银杏叶提取物、5μg/ml的环糊精、2mm的丙氨酸-谷氨酰胺、5μg/ml的l-抗败血酸。

5.根据权利要求2-4任一项所述的免疫细胞培养基，其特征在于，所述免疫细胞培养基由rpmi-1640培养基和所述活性组分构成，所述活性组分由如下组分构成：花生四烯酸、β-巯基乙醇、白藜芦醇、银杏叶提取物、环糊精、丙氨酸-谷氨酰胺、l-抗败血酸、il-2、抗cd3单克隆抗体、抗cd28单克隆抗体。

6.根据权利要求1-4任一项所述的免疫细胞培养基，其特征在于，所述环糊精为β-环糊精。

7.权利要求1-6任一项所述的免疫细胞培养基在制备免疫细胞及/或免疫细胞外泌体中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述免疫细胞包括cd3ak细胞。

9.一种免疫细胞的培养方法，其特征在于，包括如下步骤：采用权利要求5-8任一项所述的免疫细胞培养基对血液单核细胞进行培养，得到免疫细胞。

10.根据权利要求9所述的培养方法，其特征在于，采用所述免疫细胞培养基对所述血液单核细胞进行培养的步骤包括：将所述血液单核细胞接种至所述免疫细胞培养基中培养，培养过程中每隔2-3天补充一次所述免疫细胞培养基和血浆；

技术总结本发明涉及免疫细胞培养基和免疫细胞的培养方法。该免疫细胞培养基包括细胞基础培养基、以及添加到细胞基础培养基中的活性组分，所述活性组分包括：花生四烯酸、β‑巯基乙醇、白藜芦醇、银杏叶提取物、环糊精、丙氨酸‑谷氨酰胺、L‑抗败血酸，细胞基础培养基包括RPMI‑1640培养基。上述免疫细胞培养基成本仅是AIM‑V(Gibco)培养体系的1/3，但培养得到的CD3AK细胞的纯度、细胞存活率及对K562细胞的杀伤活性均高于AIM‑V培养体系，即该免疫细胞培养基的培养细胞成本低，得到的细胞质量好且对癌细胞的杀伤活性强，能够应用到制备免疫细胞及/或免疫细胞外泌体中。技术研发人员：白宗科,陈复兴,何无霜,张月圆受保护的技术使用者：深圳泽医细胞治疗集团有限公司技术研发日：技术公布日：2024/10/10