特异性结合IFN-α2的抗体、抗体片段及其用途的制作方法

本发明涉及生物医药领域，具体涉及特异性结合ifn-α2(ifn-alpha2)的抗体及其应用。

背景技术：

1、ifn-α2是干扰素家族中的一员，属于i型干扰素。它是一种强大的抗病毒和免疫调节蛋白，由多种免疫细胞，包括单核细胞、淋巴细胞和树突状细胞等分泌。ifn-α2在人体对抗病毒感染和肿瘤生长中发挥着重要作用。ifn-α2能够干扰病毒的复制过程，阻止病毒的增殖，从而抑制多种病毒的感染。ifn-α2能够激活巨噬细胞、nk细胞和t细胞等免疫细胞，增强机体的抗病毒和抗肿瘤免疫应答。ifn-α2可以直接抑制肿瘤细胞的生长和扩散，诱导肿瘤细胞凋亡，同时增强免疫系统的抗肿瘤作用。ifn-α2已被用于治疗多种病毒感染，如丙型肝炎、乙型肝炎、毛细胞白血病、慢性肉芽肿性疾病等。肿瘤治疗：ifn-α2作为免疫调节剂，在多种肿瘤的治疗中表现出一定的疗效，如黑色素瘤、肾癌、慢性髓性白血病等。

2、(ifna2b；ifn-α2b)，属于i型干扰素家族，由暴露于hiv-1bal的浆细胞样树突状细胞(pdcs)产生，以抑制病毒感染。干扰素(ifn)最初被认为是一种“干扰”体外病毒复制的物质。ifn-α/β及其相关分子被分为i型ifn，其他两类分别是ii型ifn(ifn-γ)和iii型ifn(ifn-λ)干扰素-α2亚型是目前唯一获准用于改善hbv和hcv引起的乙型肝炎病毒感染疾病的亚型。ifn-α2在细胞中表现出sortilin依赖性转运，并增加了hiv感染细胞中干扰素刺激基因(isgs)的表达水平。它还对cd8+t细胞具有细胞毒活性，能够增强cd4+t细胞耗损在干扰素-α2的等位基因中，干扰素-α2b为优势等位基因，干扰素-α2a为劣势等位基因，干扰素-α2c仅为次要等位基因。干扰素-α2在癌症研究中也有着广泛的应用，包括一些对血液系统恶性肿瘤和实体瘤的研究。

3、由于ifn-α2具有广泛的抗病毒、抗肿瘤和免疫调节功能，因此在医学领域具有广泛的应用价值。目前，ifn-α2已经被用于治疗多种病毒感染性疾病，如慢性乙型肝炎、丙型肝炎等。此外，它还被用于治疗多种肿瘤疾病，如毛细胞白血病、黑色素瘤等。在免疫调节方面，ifn-α2也被用于治疗一些自身免疫性疾病，如类风湿性关节炎等。然而，ifn-α2的应用也存在一些限制和副作用。例如，长期使用可能导致免疫系统过度激活，引发自身免疫性疾病。此外，ifn-α2还可能导致一些不良反应，如发热、头痛、乏力等。ifn-alpha是干扰素家族中的重要成员之一，而ifn-α2则是ifn-alpha亚型中的一种。

4、目前，通过基因工程创造和纯化的ifn-α2被用于某些肿瘤和其他疾病的临床治疗。抗癌：ifn-α2可诱导pbmc或肿瘤淋巴细胞(til)成为激活的淋巴杀伤细胞(lak)。lak/ifn-α2对肾细胞癌、黑色素瘤、非霍奇金淋巴瘤、结直肠癌、肝癌、卵巢癌、头颈癌、膀胱癌、肺癌和其他程度的有效性具有更明显的治疗效果。近年来，ifn-α2基因疗法已开始用于黑色素瘤、肾细胞癌和神经母细胞瘤等肿瘤的临床检测。传染病的治疗：动物实验结果表明：ifn-α2对一些病毒感染的患者由于细胞免疫功能的缺乏而有一定的疗效，需要增强细胞免疫功能。ifn-α2本身没有直接的抗病毒活性，它介导抗病毒感染，增加ctl和nk的活性，并诱导ifn-γ的产生。目前，ifn-α2活性肝炎的治疗显示出积极的结果，以及对单纯性肝炎感染、艾滋病(进入ii期临床试验)、结核病麻风病、结核病感染等的某些治疗效果。免疫保护作用：l-2作为辅助剂与弱免疫原性疫苗结合使用可以提高人体的免疫保护反应水平。此外最近发现ifn-α2具有降血压作用，而ifn-α2治疗高血压已进入i期临床试验。

5、抗体(antibody)是指机体由于抗原的刺激而产生的具有保护作用的蛋白质。免疫球蛋白(不仅仅只是抗体)是一种由浆细胞(效应b细胞)分泌，被免疫系统用来鉴别与中和外来物质如细菌、病毒等的大型y形蛋白质，仅发现存在于脊椎动物的血液等体液中，及其b细胞的细胞膜表面。抗体通常使用免疫动物的b细胞制备，通过融合永生细胞系形成分泌所需抗体克隆的杂交瘤细胞。该杂交瘤技术可大量生产一致性高、特异性强、灵敏度高的抗体。然而，随着时间的推移，杂交瘤细胞系会出现遗传漂变，导致抗体出现微小差异。抗体可以和抗原特异性结合，可利用此原理从复杂成分中分离出特异性的抗体。抗体作为研究工具，可以用于生物标志物的发现和研究，也可以作为机体内蛋白互相作用、蛋白与核酸互相作用的研究工具。抗体具有多种应用。例如一些与相应的蛋白、核酸、酶等生物大分子特异性结合的抗体，标记上荧光标记或者化学发光标记后，能详尽的这些大分子在细胞中的位置、分布、表达量等情况。抗体的应用领域还包括免疫组化(ihc)、免疫荧光(if)、免疫印迹(western blot)、酶联免疫吸附(elisa)等。抗体可以作为免疫抑制剂或者治疗药物，还可以作为医学检测或者检验试剂使用。单抗灵敏度高、特异性好，使其在鉴别菌种的型及亚型、病毒变异株，以及寄生虫不同生活周期的抗原性等方面更具独特优势。目前，抗体产品已经延伸到兽医检测检疫，食品安全检测、药物残留、致病微生物等领域。

6、杂交瘤抗体筛选技术为筛选具有靶点特异性且高亲和力的抗体提供了平台。该技术主要将能分泌抗体但不能无限增殖的浆b细胞与能在体外增殖且长期培养的骨髓瘤细胞相融合，筛选得到既能分泌特异性抗体且能长期培养无限增殖的杂交瘤细胞。并通过该杂交瘤的扩大培养实现抗体的生产制备，还可以通过液氮冷冻保存杂交瘤细胞，为后期抗体生产提供了便利。

7、需要对ifn-α2具有更高亲和力的抗体，以治疗人类ifn-α2介导的相关疾病。

技术实现思路

1、有鉴于此，发明人通过抗原免疫、杂交瘤筛选、抗体表达纯化到生物活性鉴定，筛选到2个具有全新cdr序列的抗人ifn-α2抗体。与已知的抗人ifn-α2抗体相比，该抗体对于与已知抗人ifn-α2抗体相比，具有更高的灵敏度和特异性，可用于ifn-α2的检测，并可用于治疗人类ifn-α2相关疾病的诊断、治疗和预防。

2、根据本发明的一个方面，提供了一种特异性结合ifn-α2的抗体，所述抗体的重链可变区hcdr1、hcdr2、hcdr3和轻链可变区的lcdr1、lcdr2和lcdr3选自如下组合之一：

3、1)hcdr1的序列如seq id no：1所示；

4、hcdr2的序列如seq id no：2所示；

5、hcdr3的序列如seq id no：3所示；

6、lcdr1的序列如seq id no：4所示；

7、lcdr2的序列如seq id no：5所示；

8、lcdr3的序列如seq id no：6所示；或者

9、2)hcdr1的序列如seq id no：7所示；

10、hcdr2的序列如seq id no：8所示；

11、hcdr3的序列如seq id no：9所示；

12、lcdr1的序列如seq id no：10所示；

13、lcdr2的序列如seq id no：11所示；

14、lcdr3的序列如seq id no：12所示。

15、所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如seq id no:13所示，轻链可变区的氨基酸序列如seq id no:14所示；或者所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如seq id no:15所示，轻链可变区的氨基酸序列如seq id no:16所示。

16、根据本发明的另一个方面，提供了一种重组蛋白，所述的重组蛋白包括：(i)所述抗体；以及(ii)任选的协助表达和/或纯化的标签序列。

17、根据本发明的另一个方面，提供了一种多核苷酸，所述多核苷酸编码选自下组的多肽：(1)所述的抗体；或(2)所述的重组蛋白。优选地，所述多核苷酸的重链可变区的多核苷酸序列如seq id no:17所示，轻链可变区的多核苷酸序列如seq id no:18所示；或者所述抗体的重链可变区的多核苷酸序列如seq id no:19所示，轻链可变区的多核苷酸序列如seq id no:20所示

18、根据本发明的另一个方面，提供了一种载体，所述载体含有所述多核苷酸。

19、根据本发明的另一个方面，提供了一种遗传工程化的宿主细胞，所述宿主细胞含有所述的载体或基因组中整合有所述多核苷酸。

20、根据本发明的另一个方面，提供了一种抗体偶联物，该抗体偶联物含有：(a)抗体部分，所述抗体部分选自下组：如权利要求1或2所述的抗体；以及(b)与所述抗体部分偶联的偶联部分，所述偶联部分选自下组：可检测标记物、药物、毒素、细胞因子、放射性核素、酶、或其组合。

21、根据本发明的另一个方面，提供了一种免疫细胞，所述免疫细胞表达所述抗体。

22、根据本发明的另一个方面，提供了一种药物组合物，所述药物组合物含有：(i)所述抗体、所述重组蛋白、所述多核苷酸、所述载体、所述宿主细胞、所述抗体偶联物、所述免疫细胞、或其组合；以及(ii)药学上可接受的载体。

23、根据本发明的另一个方面，提供了一种检测或测定人ifn-α2的方法，所述方法包括使用所述抗体、所述重组蛋白、所述多核苷酸、所述载体、所述宿主细胞、所述抗体偶联物、所述免疫细胞或其组合；优选地，所述检测方法包括酶免疫分析法、酶联免疫吸附法、酶联免疫斑点法、免疫组织化学法、免疫荧光法、免疫印迹法和流式细胞分析。

24、本技术的其它特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。