病毒衔接子及其用途的制作方法

本发明涉及能够改变病毒的结合谱和/或修饰病毒的细胞向性的病毒衔接子蛋白。在一个方面，本发明涉及用于病毒的共价结合衔接子蛋白，其能够改变病毒的结合谱和/或修饰病毒的细胞向性。本发明还涉及所要求保护的病毒衔接子蛋白用于修饰病毒结合谱和细胞向性、以及作为用作药物的转导载体的用途。一方面，本发明涉及用于腺相关病毒(aav)的衔接子，其能够改变aav的结合谱和/或修饰aav的细胞向性。本发明还涉及所要求保护的aav衔接子用于修饰aav结合谱和细胞向性、以及作为用作药物的转导载体的用途。背景技术：：：1、腺相关病毒2、腺相关病毒(aav)病毒属于细小病毒科。它们的特征是二十面体、无包膜衣壳，其直径为18至30nm且包含约5kb的线性单链dna。aav的有效复制需要宿主细胞与辅助病毒共感染，例如与腺病毒、疱疹病毒或牛痘病毒共感染。替代地，如果辅助aav复制所需的辅助病毒的病毒蛋白作为辅助质粒的一部分单独补充，则可以在不存在辅助病毒的情况下促进体外复制。这种生产方法是最常见的，被称为无辅助aav生产。在没有辅助病毒的情况下，aav进入静默状态，病毒基因组能够稳定整合到宿主细胞基因组中，尽管这种情况很少发生。aav感染广泛的分裂和非分裂细胞的能力、以及其病毒基因组在受感染细胞内游离存在或整合到宿主基因组内的能力，使其作为哺乳动物细胞的转导载体是特别感兴趣的。3、一般来说，约145bp长的两个反向末端重复序列(itr)足以满足载体功能。它们携带复制、包装和整合到宿主细胞基因组中所需的“顺式(cis)”信号。为了包装在重组载体颗粒中，将携带用于非结构蛋白(rep蛋白)和用于结构蛋白(cap蛋白)的基因的载体质粒转染到适合于包装的细胞(例如，海拉细胞或hek293细胞)中，然后感染细胞，例如，用腺病毒感染或用辅助质粒共转染。4、aav衣壳由以下项的三种不同的蛋白质组成：vp1、vp2和vp3，这三种不同的蛋白质的相对比例分别约为1:1:10，相当于8.3％的vp1、8.3％的vp2和83.3％的vp3。aav衣壳基因位于aav基因组的末端处，并且使用不同的起始密码子由相同的开放阅读框(orf)编码。vp1基因包含完整的vp2基因序列，而vp2基因序列又包含具有特定n-末端区域的完整vp3基因序列。一个阅读框编码所有三种aav衣壳蛋白这一事实导致了所有衣壳蛋白的强制共表达，尽管程度不同。5、衣壳蛋白的分子量针对vp1为87kda、针对vp2为73kda并且针对vp3为62kda。例如，衣壳基因的序列描述于srivastava,a.等人(1983),j.virol.,45,555-564；muzyczka,n.(1992),curr.top.micro.immunol.,158,97-129、ruffing,n.等人(1992),j.virol.,66,6922-6930或rutledge,e.a.等人(1998)j.virol.72,309-319，所述文献通过引用以其整体并入本文。aav基因组的物理和基因图谱描述于例如kotin,r.m.(1994),human genetherapy,5,793-801，其通过引用以其整体并入本文。本文还在图7至19和seq id no 7-19中提供了示例性aav衣壳序列。6、各种aav血清型还是已知的，在各种aav血清型中的人aav血清型2(aav2)代表具有用于体细胞基因疗法的有利特性的病毒载体。其基本优点是缺乏对人类的致病性、病毒基因组在受感染细胞中作为附加体持续存在或其稳定整合到细胞基因组中、感染非分裂细胞的能力、病毒粒子的稳定性(这使得纯化得到高滴度成为可能)、低免疫原性、以及在重组aav载体中基本上不存在病毒基因和基因产物，这从用于基因疗法的安全性的角度来看是有利的。现在，将基因克隆到aav载体中是通过技术人员通常已知的方法进行的，例如在以下项中进行描述的：wo 95/23 867、chiorini j.a.等人(1995),human gene therapy,6,1531-1541或kotin,r.m.(1994)，其通过引用以其整体并入本文。7、例如，aav2通常具有宽活性谱(向性)。上皮组织(例如，人上皮肿瘤细胞系)以及原发性肿瘤物质(例如，宫颈癌或卵巢癌或黑色素瘤)和人角质形成细胞都被非常有效地感染(70-80％)，而造血细胞(例如，淋巴造血细胞)被感染的效率降低10倍至100倍(0.5-5％)(mass等人(1998)human gene therapy,9,1049-1059，其通过引用以其整体并入本文)。8、原因之一可能是aav与细胞表面上的aav受体之间的相互作用对于将aav摄取到细胞中是必要的。因此，例如，假定的主要aav2受体是150kda的细胞膜糖蛋白(mizukami,h.等人(1996),virology,217,124-130，其通过引用以其整体并入本文)或硫酸乙酰肝素蛋白多糖(summerford,c.&samulski,r.j.(1998),j.virol.,72,1438-1445，其通过引用以其整体并入本文)。已经确定的可能的第二受体是：αvβ5整合素(summerford等人，(1999),naturemedicine 5,78-82，其通过引用以其整体并入本文)和人成纤维细胞生长因子受体1(qing等人，(1999)nature medicine 5,71-77，其通过引用以其整体并入本文)。结合研究现已经表明，在被aav2无效感染的细胞上，此类受体的表面密度会降低。9、已知可以通过逆转录病毒和腺病毒的衣壳蛋白的基因修饰来引入仅在特定细胞上表达的受体的结合位点，并且因此使得受体介导的载体靶向成为可能(参见，例如，cosset,f.l.和russell,s.j.(1996),gene ther.,3,946-956、douglas,j.t.等人(1996),nat.biotechnol.,14,1574-1578、krasnykh,v.n.等人(1996),j.virol.,70,6839-6846、stevenson,s.c.等人(1997),j.virol.,71,4782-4790或wickman,t.j.等人(1996),nat.biotechnol.,14,1570-1573，其通过引用以其整体并入本文)。10、wo 96/00587还涉及avv衣壳融合蛋白，该avv衣壳融合蛋白被认为是含有临床相关抗原的异源表位、被认为是诱导免疫应答并且被认为是不干扰衣壳形成。steinbach等人(1997)(biol.abstr.104,参考文献46570，其通过引用以其整体并入本文)涉及先前已在杆状细胞系统中表达的aav颗粒的体外组装。cap基因也发生突变，但这些突变并不是为了导致向性的改变，而是为了产生一种在每种情况下仅表达一个vp蛋白的质粒构建体。ruffing等人(1994)(j.gen.virol.75,3385-3392，其通过引用以其整体并入本文)旨在研究aav2的天然向性。为此目的，在aav2 vp蛋白的c末端引入突变，基本假设是通过这种方式改变rgd基序。11、aav的间接靶向在bartlett等人(1999；nat.biotechnol.17,181-186，其通过引用以其整体并入本文)中公开。在这种情况下，使用了针对aav2衣壳和靶细胞两者的双特异性抗体。yang等人(1998；hum.gene ther.1,1929-1937，其通过引用以其整体并入本文)公开了针对cd34分子的单链抗体片段，其与vp2的n末端融合，直接插入vp1的n末端处。然而，这种方法有两个明显的缺点。首先，感染滴度非常低，其次，为了成功包装，必须将融合蛋白与未突变的衣壳蛋白vp1、vp2和vp3共表达。然而，这导致了嵌合型和野生型衣壳蛋白的混合物，该混合物的组成和由此得到的活性是不可预测的。此外，相较于野生型，经由海拉细胞野生型受体的包装效率和感染性也大大降低。12、因此，本发明的一个目的是以能够比已知的aav载体更特异和更有效的基因转移这样的方式修饰aav。13、现在令人惊讶地发现，可以修饰aav结合蛋白(诸如，aav受体(aavr、kiaa0319l))或其部分以提供与aav的可靠结合来作为融合蛋白的一部分，其中融合配偶体可以用于改变aav的向性。在一些方面，结合蛋白可以与病毒共价结合。类似地，作为融合蛋白的一部分，可以修饰其他病毒结合蛋白以提供与病毒衣壳的一致共价结合，其中融合配偶体可以用于改变病毒的向性。技术实现思路1、本技术实现要素：介绍了详细描述中更详细描述的发明构思。它不应该被用来识别所要求保护的主题的基本特征，也不应该被用来限制所要求保护的主题的范围。2、本发明提供了一种经分离的多肽，其能够与病毒衣壳结合。3、本发明提供了一种经分离的多肽，该经分离的多肽包含能够与病毒衣壳共价结合的一个或多个半胱氨酸残基。4、本发明还提供了一种病毒衔接子分子，其包含：(i)经分离的多肽，该经分离的多肽能够与病毒衣壳结合；以及(ii)配体。5、本发明还提供了一种病毒衔接子分子，其包含：(i)经分离的多肽，该经分离的多肽包含能够与病毒衣壳共价结合的一个或多个半胱氨酸残基；以及(ii)配体。6、在一些实施例中，能够与病毒衣壳共价结合的一个或多个半胱氨酸残基与经分离的多肽是异源的。在一些实施例中，病毒衔接子蛋白包含：(i)经分离的多肽，该经分离的多肽包含能够与病毒衣壳共价结合的一个或多个半胱氨酸残基；以及(ii)配体，其中一个或多个半胱氨酸残基与经分离的多肽是异源的。在一些实施例中，经分离的多肽或共价结合病毒衔接子分子能够与未修饰的野生型病毒衣壳结合。7、在一些实施例中，经分离的多肽或病毒衔接子分子能够与相较于野生型病毒衣壳具有5个或更少个(例如，5个、4个、3个、2个或1个)氨基酸点突变的病毒衣壳结合。在一些实施例中，经分离的多肽或病毒衔接子分子能够与相对于野生型病毒衣壳具有不超过5个氨基酸(即，1个、2个、3个、4个或5个氨基酸)的氨基酸插入或缺失的病毒衣壳结合。在一些实施例中，经分离的多肽或病毒衔接子分子能够与相对于野生型病毒衣壳不具有插入或缺失的病毒衣壳结合。8、在一些实施例中，经分离的多肽或病毒衔接子分子包含能够与腺相关病毒衣壳结合的腺相关病毒受体(aavr、kiaa0319l)的一部分。在一些实施例中，经分离的多肽或aav衔接子分子包含腺相关病毒受体(aavr、kiaa0319l)的全长序列。在一些实施例中，腺相关病毒受体(aavr、kiaa0319l)序列包含seq id no:1的氨基酸序列。在一些实施例中，经分离的多肽或aav衔接子分子包含aavr多肽中的一个或多个点突变，任选地其中一个或多个点突变通过引用seq id no:1来定义。9、在一些实施例中，经分离的多肽或病毒衔接子分子包含具有一个或多个半胱氨酸残基并且能够与腺相关病毒衣壳共价结合的腺相关病毒受体(aavr、kiaa0319l)的一部分。在一些实施例中，经分离的多肽或病毒衔接子分子包含具有一个或多个半胱氨酸残基并且能够与腺相关病毒衣壳共价结合的腺相关病毒受体(aavr、kiaa0319l)的全长序列。在一些实施例中，腺相关病毒受体(aavr、kiaa0319l)序列包含seq id no:1的氨基酸序列。在一些实施例中，经分离的多肽或共价结合病毒衔接子分子包含aavr多肽中的一个或多个点突变，任选地其中一个或多个点突变通过引用seq id no:1来定义。10、在一些实施例中，经分离的多肽或共价结合病毒衔接子分子包含在aavr多肽中的一个或多个点突变以引入一个或多个异源半胱氨酸残基，任选地其中一个或多个点突变通过引用seq id no:1来定义。11、在一些实施例中，经分离的多肽或病毒衔接子分子包含选自由以下项组成的列表的多肽的一部分：darpin、纳米抗体、合适的抗体样蛋白、衍生自脂质运载蛋白折叠体的蛋白、亲和体(affibody)(例如，衍生自蛋白a的z结构域的亲和体)、纤连蛋白的结构域、fyn的sh3结构域、衍生自蛋白酶抑制剂stefin a的affimer或支架、非抗体支架蛋白(adhiron)和抗体或其抗原结合片段。在一些实施例中，经分离的多肽或aav衔接子分子包含抗体或其抗原结合片段。12、在一些实施例中，经分离的多肽或病毒衔接子分子包含选自由以下项组成的列表的多肽：darpin、纳米抗体、合适的抗体样蛋白、衍生自脂质运载蛋白折叠体的蛋白、亲和体(例如，衍生自蛋白a的z结构域的亲和体)、纤连蛋白的结构域、fyn的sh3结构域、衍生自蛋白酶抑制剂stefin a的affimer或支架、非抗体支架蛋白(adhiron)和抗体或其抗原结合片段。在一些实施例中，经分离的多肽或aav衔接子分子包含抗体或其抗原结合片段。13、在一些实施例中，经分离的多肽或病毒衔接子分子包含中和抗体a20的抗原结合部分。在一些实施例中，经分离的多肽或病毒衔接子分子包含与中和抗体a20的一个或多个互补决定区(cdr)基本相同的序列，例如其中中和抗体a20的一个或多个互补决定区(cdr)可以包含1个、2个或3个氨基酸点突变，任选地其中点突变中的一者或多者是异源半胱氨酸残基。在一些实施例中，经分离的多肽或病毒衔接子分子包含与中和抗体a20的互补决定区(cdr)中的每一者基本相同的一个或多个序列，例如其中中和抗体a20的1个、2个、3个、4个、5个或6个互补决定区(cdr)可以包含1个、2个或3个氨基酸点突变，任选地其中点突变中的一者或多者是异源半胱氨酸残基。14、在一些实施例中，经分离的多肽或病毒衔接子分子包含中和抗体a20的一个或多个互补决定区(cdr)的全长序列，例如其中多肽包含以下项中的一者或多者：抗体a20的vhcdr1(seq id no:26)、抗体a20的vhcdr2(seq id no:27)、抗体a20的vhcdr3(seq id no:28)、抗体a20的vlcdr1(seq id no:22)、抗体a20的vlcdr2(seq id no:23)和抗体a20的vlcdr3(seq id no:24)。15、在一些实施例中，经分离的多肽或病毒衔接子分子包含中和抗体a20的所有互补决定区(cdr)。在一些实施例中，经分离的多肽或病毒衔接子分子包含与中和抗体a20的全长vh链(seq id no:25)和vl链(seq id no:21)序列基本相同的一个或多个序列，例如，其中中和抗体a20的vh和/或vl序列可以包含1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个氨基酸点突变，任选地其中点突变中的一者或多者是异源半胱氨酸残基。16、在一些实施例中，经分离的多肽或病毒衔接子分子包含中和抗体a20的全长vh链(seq id no:25)和vl链(seq id no:21)序列。17、在一些实施例中，经分离的多肽或病毒衔接子分子进一步包含以下项中的一者或多者：18、一种或多种非天然氨基酸，19、一个或多个与多肽交联的化学部分，20、生物素标签，例如生物素化的aavr，21、spytag肽，例如aavr-spytag；和/或22、蛋白a或蛋白g多肽。23、在一些实施例中，配体能够与细胞表面分子结合。在一些实施例中，配体是人类蛋白质，诸如抗体或其抗原结合片段。在一些实施例中，配体是选自由以下项组成的列表的一种或多种配体：24、白细胞介素-1、白细胞介素-2、白细胞介素-3、白细胞介素-4、白细胞介素-5、白细胞介素-6、白细胞介素-7、白细胞介素-8、白细胞介素-9、白细胞介素-10、白细胞介素-11、白细胞介素-12、白细胞介素-13、白细胞介素-14、白细胞介素-15、白细胞介素-16、白细胞介素-17、白细胞介素-18、白细胞介素-19、白细胞介素-20、白细胞介素-21、白细胞介素-22、白细胞介素-23、白细胞介素-24、白细胞介素-25、白细胞介素-26、白细胞介素-27、白细胞介素-28、白细胞介素-29、白细胞介素-30、白细胞介素-31、白细胞介素-32、白细胞介素-33、白细胞介素-34、白细胞介素-35、胰岛素、转铁蛋白、cd2、cd58、cd59、cd2、cd40l/cd154、cd5、cd72、cd5l、cd23、cd70、cd80、cd86、s100ap、cd178、cd155、cd106、csf1、cd166、fasl、cd242、cd252、trail、rankl、april、cd257、cd272、cd273、cd274、cd275、pd-l1、pd-l2、cas13和cas7-11、内皮素、瘦素、后叶加压素、cd10、cd31、cd119、爱帕琳(apelin)、elabela、肾上腺髓质素、来自肉毒杆菌毒素的靶向结构域、神经肽、细胞因子或小分子。25、在一些实施例中，配体是小分子，任选地其中小分子经由n-羟基琥珀酰亚胺(nhs)或马来酰亚胺连接至经分离的多肽或病毒衔接子分子。在一些实施例中，配体是小分子，任选地其中经分离的多肽或病毒衔接子分子包含将小分子连接至经分离的多肽或病毒衔接子分子的非常规氨基酸。26、在一些实施例中，配体结合选自由以下项组成的列表的一种或多种细胞表面分子：27、her2、白细胞介素-1受体、白细胞介素-2受体、白细胞介素-3受体、白细胞介素-4受体、白细胞介素-5受体、白细胞介素-6受体、白细胞介素-7受体、白细胞介素-8受体、白细胞介素-9受体、白细胞介素-10受体、白细胞介素-11受体、白细胞介素-12受体、白细胞介素-13受体、白细胞介素-15受体、白细胞介素-18受体、白细胞介素-20受体、白细胞介素-21受体、白细胞介素-22受体、白细胞介素-23受体、白细胞介素-27受体、白细胞介素-28受体、胰岛素受体、转铁蛋白受体、cd58、cd2、cd2、cd59、cd40、cd72、cd5、cd36、cd19、cd21、cd81、cd27、cd28、ctla-4、cd85j、cd95、cd96、α4β1整合素、cd115、cd6、cd178、lfa-1、tnfrsf4、dr4、dr5、rank/cd265、taci/cd267、cd267、cd268、cd269、hvem、pd1/cd279、b7-1/cd80、cd278、cd4、cd8、cd19、nmdar、ampar、mglur5、drd1、drd2、bmp4、glp1r、瘦素受体、α5β5整合素和糖rna。28、在一些实施例中，腺相关病毒受体(aavr、kiaa0319l)的部分包含pkd1结构域的至少一部分、pkd2结构域的至少一部分、pkd3结构域的至少一部分、pkd4结构域的至少一部分、pkd5结构域的至少一部分或它们的任意组合。29、在一些实施例中，腺相关病毒受体(aavr、kiaa0319l)的部分包含pkd1结构域、pkd2结构域、pkd3结构域、pkd4结构域、pkd5结构域或它们的任意组合。根据权利要求9至30中任一项所述的经分离的多肽或共价结合病毒衔接子分子，其中腺相关病毒受体(aavr、kiaa0319l)的部分包含选自由以下项组成的列表的序列：seq id no:2、seq id no:3、seqid no:4、seq id no:5和seq id no:6。30、在一些实施例中，腺相关病毒受体(aavr、kiaa0319l)的部分包含腺相关病毒受体(aavr、kiaa0319l)的全长序列，任选地其中全长序列包含seq id no:1。31、本发明还提供了一种病毒颗粒，其与至少一种根据本发明的经分离的多肽或病毒衔接子分子结合。在一些实施例中，病毒颗粒与至少一种根据本发明的经分离的多肽或病毒衔接子分子共价结合。32、在一些实施例中，一种或多种病毒衣壳蛋白包含能够与经分离的多肽共价结合的一个或多个半胱氨酸残基。在一些实施例中，一种或多种病毒衣壳蛋白包含能够与经分离的多肽中的一个或多个半胱氨酸残基形成二硫桥的一个或多个半胱氨酸残基。33、在一些实施例中，病毒是腺相关病毒，任选地其中腺相关病毒选自由以下项组成的列表：aav1、aav2、aav3、aav4、aav5、aav6、aav7、aav8、aav9、aav10、aav11、aav12、aav13、aavrh.8、aavrh.10、aavrh.74。在一些实施例中，腺相关病毒是aav1。在一些实施例中，腺相关病毒是aav2。在一些实施例中，腺相关病毒是野生型aav。34、在一些实施例中，腺相关病毒包含选自由以下项组成的组的衣壳氨基酸序列的一部分：seq id no:7、seq id no:8、seq id no:9、seq id no:10、seq id no:11、seq id no:12、seq id no:13、seq id no:14、seq id no:15、seq id no:16、seq id no:17、seq idno:18和seq id no:19。35、在一些实施例中，腺相关病毒包含选自由以下项组成的组的衣壳氨基酸序列的全长：seq id no:7、seq id no:8、seq id no:9、seq id no:10、seq id no:11、seq id no:12、seq id no:13、seq id no:14、seq id no:15、seq id no:16、seq id no:17、seq idno:18和seq id no:19。36、在一些实施例中，腺相关病毒相对于野生型氨基酸序列具有一个或多个保守氨基酸改变，例如相对于野生型氨基酸序列的1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个或20个保守氨基酸改变，任选地其中野生型氨基酸序列选自由以下项组成的组：seq id no:7、seq id no:8、seq id no:9、seq idno:10、seq id no:11、seq id no:12、seq id no:13、seq id no:14、seq id no:15、seq idno:16、seq id no:17、seq id no:18和seq id no:19。在一些实施例中，腺相关病毒相对于野生型氨基酸序列具有5个或更少个非保守氨基酸改变，例如相对于野生型氨基酸序列的5个、4个、3个、2个或1个非保守氨基酸改变，任选地其中野生型氨基酸序列选自由以下项组成的组：seq id no:7、seq id no:8、seq id no:9、seq id no:10、seq id no:11、seq idno:12、seq id no:13、seq id no:14、seq id no:15、seq id no:16、seq id no:17、seq idno:18和seq id no:19。37、在一些实施例中，病毒选自由以下项组成的列表：腺病毒、爱知病毒、澳大利亚蝙蝠溶血病毒、bk多瘤病毒、班纳病毒、巴尔马森林病毒、布尼安维拉病毒、布尼亚病毒、拉克罗斯布尼亚病毒、雪鞋野兔猴疱疹病毒、金迪普拉病毒、基孔肯雅病病毒、寇沙病毒、牛痘病毒、柯萨奇病毒、克里米亚-刚果出血热病毒、登革病毒、多里病毒、道格比病毒、杜文黑基病毒、东部马脑炎病毒、埃博拉病毒、艾柯病毒、脑心肌炎病毒、艾普斯登-巴尔病毒、欧洲蝙蝠溶血病毒、gb病毒、丙型/g型肝炎病毒、汉塔病毒、亨德拉病毒、甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、戊型肝炎病毒、丁型肝炎病毒、马痘病毒、人类腺病毒、人类星状病毒、人类冠状病毒、人类巨细胞病毒、人类肠道病毒、人类疱疹病毒、人类疱疹病毒、人类免疫缺陷病毒、人类乳头瘤病毒、人类乳头瘤病毒、人副流感病毒、人类细小病毒、人呼吸道合胞病毒、人鼻病毒、人sars冠状病毒、人泡沫逆转录病毒、人t淋巴细胞病毒、人环曲病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒、丙型流感病毒、伊斯法罕病毒、jc多瘤病毒、日本脑炎病毒、胡宁沙粒病毒、ki多瘤病毒、昆津病毒、拉各斯蝙蝠病毒、维多利亚湖马尔堡病毒、兰加特病毒、拉沙病毒、洛兹代尔病毒、羊跳跃病病毒、淋巴细胞性脑膜脊髓炎病毒、马丘波病毒、马亚罗病毒、mers冠状病毒、麻疹病毒、门戈脑心肌炎病毒、默克尔细胞多瘤病毒、莫科拉病毒、传染性软疣病毒、猴痘病毒、腮腺炎病毒、墨累山谷脑炎蚊传病毒、新泽西多瘤病毒、纽约病毒、尼帕病毒、诺沃克病毒、阿尼昂-尼昂病毒、口疮病毒、奥罗普切病毒、皮秦德病毒、脊髓灰质炎病毒、蓬塔托罗白岭病毒、普马拉病毒、狂犬病病毒、裂谷热病毒、罗莎病毒、阿罗斯河病毒、轮状病毒、a型轮状病毒、b型轮状病毒、c型风疹病毒、鹭山病毒、唾液病毒、a型白蛉热西西里病毒、札幌病毒、sars冠状病毒、塞姆利基森林病毒、首尔病毒、猿猴泡沫病毒、猿猴病毒40、辛德毕斯病毒、南安普敦病毒、圣路易斯脑炎病毒、蜱传的波瓦桑病毒、托克泰诺病毒(torque teno virus)、托斯卡纳病毒、尤库尼米病毒、痘苗病毒、水痘带状疱疹病毒、天花病毒、委内瑞拉马脑炎病毒、泡疹性口炎病毒、西部马脑炎病毒、wu多瘤病毒、西尼罗河病毒、雅巴猴肿瘤病毒、雅巴样疾病病毒、黄热病病毒和寨卡病毒。在一些实施例中，病毒是野生型病毒。38、在一些实施例中，病毒是腺病毒，并且能够与病毒衣壳结合的经分离的多肽、或包含能够与病毒衣壳结合的经分离的多肽以及配体的病毒衔接子分子包含柯萨奇病毒-腺病毒受体(cxadr)的一部分，任选地其中cxadr序列是seq id no:20。39、在一些实施例中，病毒是腺病毒，并且包含能够与病毒衣壳共价结合的一个或多个半胱氨酸残基的经分离的多肽、或包含含能够与病毒衣壳共价结合的一个或多个半胱氨酸残基的经分离的多肽以及配体的病毒衔接子分子包含柯萨奇病毒-腺病毒受体(cxadr)的一部分，任选地其中cxadr序列是seq id no:20。40、在一些实施例中，病毒是腺病毒，并且能够与病毒衣壳结合的经分离的多肽、或包含能够与病毒衣壳结合的经分离的多肽以及配体的病毒衔接子分子包含cd46的一部分，任选地其中cd46序列是seq id no:29。41、在一些实施例中，病毒是腺病毒，并且包含能够与病毒衣壳共价结合的一个或多个半胱氨酸残基的经分离的多肽、或包含含能够与病毒衣壳共价结合的一个或多个半胱氨酸残基的经分离的多肽以及配体的病毒衔接子分子包含cd46的一部分，任选地其中cd46序列是seq id no:29。42、在一些实施例中，病毒是腺病毒，并且包含能够与病毒衣壳共价结合的一个或多个半胱氨酸残基的经分离的多肽、或包含含能够与病毒衣壳共价结合的一个或多个半胱氨酸残基配体的经分离的多肽以及配体的病毒衔接子分子包含柯萨奇病毒-腺病毒受体(cxadr)的全长序列，任选地其中cxadr序列是seq id no:20。在一些实施例中，一种或多种病毒衣壳具有相对于野生型氨基酸序列引入的一个或多个异源半胱氨酸残基，例如相对于野生型氨基酸序列的1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个异源半胱氨酸残基。在一些实施例中，将一个或多个异源半胱氨酸残基在经分离的多肽或病毒衔接子分子与病毒衣壳之间的界面处引入。43、在一些实施例中，病毒是aav1，并且经分离的多肽、或经分离的融合多肽包含能够与腺相关病毒衣壳共价结合的腺相关病毒受体(aavr、kiaa0319l)的一部分，并且其中aav1包含选自以下项的一个或多个突变：gly266cys、thr504cys和asp590cys，并且44、其中aavr多肽或融合多肽包含选自以下项的一个或多个突变：thr434cys、asp429cys和ser425cys。45、在一些实施例中，病毒是aav2，并且经分离的多肽、或经分离的融合多肽包含能够与腺相关病毒衣壳共价结合的腺相关病毒受体(aavr、kiaa0319l)的一部分，并且其中aav2包含选自以下项的一个或多个突变：gly265cys、thr503cys和gln589cys，并且其中aavr多肽或融合多肽包含选自以下项的一个或多个突变：thr434cys、asp429cys和ser425cys。46、在一些实施例中，病毒是aav2，并且经分离的多肽、或经分离的融合多肽包含能够与腺相关病毒衣壳共价结合的腺相关病毒受体(aavr、kiaa0319l)的一部分，并且其中aav2包含gln589cys突变，并且其中aavr多肽或融合多肽包含选自以下项的一个或多个突变：ser425cys和val480glu，任选地其中aavr多肽或融合多肽包含ser425cys突变和val480glu突变两者。47、在一些实施例中，病毒是aav2，并且经分离的多肽、或经分离的融合多肽包含能够与腺相关病毒衣壳共价结合的腺相关病毒受体(aavr、kiaa0319l)的pkd2结构域(例如，seqid no:3)，并且其中aav2包含gln589cys突变，并且其中aavr多肽或融合多肽包含选自以下项的一个或多个突变：ser425cys和val480glu，任选地其中aavr多肽或融合多肽包含ser425cys突变和val480glu突变两者。48、在一些实施例中，病毒是aav1，并且经分离的多肽、或经分离的融合多肽包含能够与腺相关病毒衣壳共价结合的腺相关病毒受体(aavr、kiaa0319l)的一部分，并且其中aav2包含gln589cys突变，并且其中aavr多肽或融合多肽包含选自以下项的一个或多个突变：ser425cys和val480glu，任选地其中aavr多肽或融合多肽包含ser425cys突变和val480glu突变两者。49、在一些实施例中，病毒是aav1，并且经分离的多肽、或经分离的融合多肽包含能够与腺相关病毒衣壳共价结合的腺相关病毒受体(aavr、kiaa0319l)的pkd2结构域(例如，seqid no:3)，并且其中aav2包含gln589cys突变，并且其中aavr多肽或融合多肽包含选自以下项的一个或多个突变：ser425cys和val480glu，任选地其中aavr多肽或融合多肽包含ser425cys突变和val480glu突变两者。50、在一些实施例中，病毒是aav5，并且经分离的多肽、或经分离的融合多肽包含能够与腺相关病毒衣壳共价结合的腺相关病毒受体(aavr、kiaa0319l)的一部分，并且其中aav5包含gln697cys突变，并且其中aavr多肽或融合多肽包含ser356cys突变。51、在一些实施例中，病毒是aav5，并且经分离的多肽、或经分离的融合多肽包含能够与腺相关病毒衣壳共价结合的腺相关病毒受体(aavr、kiaa0319l)的pkd1结构域(例如seqid no:2)，并且其中aav5包含gln697cys突变，并且其中aavr多肽或融合多肽包含ser356cys突变。52、在一些实施例中，病毒是aav2，并且经分离的多肽、或经分离的融合多肽包含中和抗体a20的抗原结合部分，并且其中aav2包含选自以下项的一个或多个突变：ser264cys、val708cys和asn717cys，并且其中中和抗体a20多肽或融合多肽包含选自以下项的一个或多个突变：vh tyr102cys、vh ser56cys和vl ile93cys。53、在一些实施例中，病毒是aav2，并且经分离的多肽、或经分离的融合多肽包含中和抗体a20的抗原结合部分，并且其中aav2包含选自以下项的一个或多个突变：gly266cys、thr504cys和asp590cys，并且其中中和抗体a20多肽或融合多肽包含选自以下项的一个或多个突变：vh tyr102cys、vh ser56cys和vl ile93cys。54、在一些实施例中，腺相关病毒颗粒包含在衣壳蛋白中的、介导与非蛋白结合物的相互作用的一个或多个氨基酸改变，该非蛋白结合物诸如为硫酸乙酰肝素蛋白多糖(hspg)、o-连接唾液酸、n-连接唾液酸、n-连接半乳糖。55、在一些实施例中，腺相关病毒颗粒包含aav2的精氨酸残基585和588处的突变。56、本发明还提供了包含根据本发明的病毒颗粒的药物组合物。57、本发明还提供了一种共价修饰病毒颗粒的方法，该方法包括：58、提供病毒颗粒；59、提供经分离的多肽，该经分离的多肽能够与病毒颗粒的病毒衣壳共价结合；以及60、将病毒颗粒与经分离的多肽组合，使得经分离的多肽与病毒颗粒共价结合。61、本发明还提供了一种共价修饰病毒颗粒的方法，该方法包括：62、提供病毒颗粒；63、提供病毒衔接子分子，该病毒衔接子分子包含经分离的多肽以及配体，该经分离的多肽能够与病毒颗粒的病毒衣壳共价结合；以及64、将病毒颗粒与病毒衔接子分子组合，使得经分离的融合多肽与病毒颗粒共价结合。65、在一些实施例中，该方法进一步包括将一个或多个异源半胱氨酸残基、例如1个、2个或3个异源半胱氨酸残基引入经分离的多肽或病毒衔接子分子。在一些实施例中，该方法进一步包括将一个或多个异源半胱氨酸残基、例如1个、2个或3个异源半胱氨酸残基引入病毒衣壳。66、在一些实施例中，该方法进一步包括将一个或多个异源半胱氨酸残基引入经分离的多肽或病毒衔接子分子和病毒衣壳两者，例如将1个、2个或3个异源半胱氨酸残基引入到经分离的多肽或病毒衔接子分子和病毒衣壳两者。67、在一些实施例中，经分离的多肽或病毒衔接子分子与病毒颗粒的结合减少或消除了一种或多种病毒衣壳蛋白的天然向性。在一些实施例中，经分离的多肽或病毒衔接子分子与病毒颗粒的结合增加了病毒颗粒对一种或多种细胞类型的向性。68、在一些实施例中，经分离的多肽或病毒衔接子分子与病毒颗粒的结合增加和/或减少病毒颗粒对选自由以下项组成的列表的一种或多种细胞类型的向性：神经元、巨噬细胞、小胶质细胞、t-细胞、b-细胞、树突状细胞、抗原呈递细胞、nk细胞、癌细胞、肌肉细胞、肝细胞、光感受器、胰岛素β细胞、肾细胞和肺细胞。69、在一些实施例中，病毒颗粒的向性相较于不包含经分离的多肽或病毒衔接子分子的病毒颗粒的天然向性降低或增加了至少10％，例如至少20％、至少30％，至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或至少100％。在一些实施例中，经分离的多肽或病毒衔接子分子与病毒颗粒的结合允许病毒颗粒使用病毒作为支架以多聚体方式呈现蛋白抗原。70、在一些实施例中，经分离的多肽或病毒衔接子分子与病毒颗粒的共价结合选择性诱导细胞裂解，任选地其中细胞裂解在选自由以下项组成的列表的一种或多种细胞类型中诱导：神经元、巨噬细胞、小胶质细胞、t-细胞、b-细胞、树突状细胞、抗原呈递细胞、nk细胞、癌细胞、肌肉细胞、肝细胞、光感受器、胰岛素β细胞和肺细胞。71、本发明还提供了一种将病毒颗粒靶向至靶细胞的方法，其包括：72、提供病毒颗粒；73、提供病毒衔接子分子，该病毒衔接子分子包含能够与病毒颗粒的病毒衣壳结合的经分离的多肽、以及对靶细胞具有特异性的配体；74、将病毒颗粒与病毒衔接子分子组合，使得病毒衔接子分子与病毒颗粒结合，从而产生经修饰的病毒颗粒；以及75、使包含靶细胞的细胞混合物与经修饰的病毒颗粒接触。76、在本发明方法的一些实施例中，能够与腺相关病毒(aav)衣壳结合的经分离的多肽包含腺相关病毒受体(aavr、kiaa0319l)的一部分。在本发明方法的一些实施例中，能够与腺相关病毒(aav)衣壳结合的经分离的多肽包含腺相关病毒受体(aavr、kiaa0319l)的pkd1结构域的至少一部分、pkd2结构域的至少一部分、pkd3结构域的至少一部分、pkd4结构域的至少一部分、pkd5结构域的至少一部分或它们的任意组合。本发明的方法的能够与腺相关病毒(aav)衣壳结合的经分离的多肽包含腺相关病毒受体(aavr、kiaa0319l)的完整pkd1结构域、完整pkd2结构域、完整pkd3结构域、完整pkd4结构域、完整pkd5结构域或它们的任意组合。在一些实施例中，能够与腺相关病毒(aav)衣壳结合的经分离的多肽包含aavr多肽中的一个或多个突变，任选地其中所述一个或多个突变是通过引用seq id no:1来定义的，能够与腺相关病毒(aav)衣壳结合的经分离的多肽包含腺相关病毒受体(aavr、kiaa0319l)的pkd1结构域的至少一部分、pkd2结构域的至少一部分、pkd3结构域的至少一部分、pkd4结构域的至少一部分、pkd5结构域的至少一部分或它们的任意组合，并且其中能够与腺相关病毒(aav)衣壳结合的经分离的多肽包含aavr多肽中的一个或多个突变，其中任选地其中一个或多个突变通过引用seq id no:1来定义。在一些实施例中，能够与腺相关病毒(aav)衣壳结合的经分离的多肽包含腺相关病毒受体(aavr、kiaa0319l)的完整pkd1结构域、完整pkd2结构域、完整pkd3结构域、完整pkd4结构域、完整pkd5结构域或它们的任意组合，并且其中能够与腺相关病毒(aav)衣壳结合的经分离的多肽包含aavr多肽中的一个或多个突变，任选地其中一个或多个突变是通过引用seq id no:1定义的。77、在本发明方法的一些实施例中，能够与病毒衣壳共价结合的经分离的多肽包含腺相关病毒受体(aavr、kiaa0319l)的一部分。在本发明方法的一些实施例中，能够与病毒衣壳共价结合的经分离的多肽包含腺相关病毒受体(aavr、kiaa0319l)的pkd1结构域的至少一部分、pkd2结构域的至少一部分、pkd3结构域的至少一部分、pkd4结构域的至少一部分、pkd5结构域的至少一部分或它们的任意组合。在本发明方法的一些实施例中，能够与病毒衣壳共价结合的经分离的多肽包含腺相关病毒受体(aavr、kiaa0319l)的pkd1结构域、pkd2结构域、pkd3结构域、pkd4结构域、pkd5结构域或它们的任意组合。78、在本发明方法的一些实施例中，能够与腺相关病毒(aav)衣壳共价结合的经分离的多肽包含选自由以下项组成的列表的序列：seq id no:2、seq id no:3、seq id no:4、seq id no:5和seq id no:6。在本发明方法的一些实施例中，能够与病毒衣壳结合的经分离的多肽包含腺相关病毒受体(aavr、kiaa0319l)的全长序列，任选地其中全序列包含seqid no:1。79、本发明还提供了将目的核酸序列递送至靶细胞的方法，其包括使靶细胞与根据本发明的经修饰的病毒颗粒、或根据本发明的药物组合物接触，其中所述病毒颗粒包含目的核酸序列。80、在本发明方法的一些实施例中，目的核酸序列编码选自由以下项组成的列表的蛋白质：81、rab护送蛋白1、rpe65、因子viii、因子ix、cochlin、cln7、酸性α-葡萄糖苷酶(gaa)、水通道蛋白1、胶质细胞系源性神经营养因子、天冬氨酸酰化酶、芳香族l-氨基酸脱羧酶、色素性视网膜炎缺陷gtp酶调节剂、肌浆网钙atp酶、环核苷酸门控通道β3、神经营养因子、半乳糖苷酶β1、葡萄糖-6-磷酸酶、苯丙氨酸羟化酶、鸟氨酸转氨基甲酰基酶、肌营养不良蛋白和肉碱棕榈酰转移酶ii、苯丙氨酸羟化酶(pah)、囊性纤维化跨膜电导调节剂(cftr)。82、在一些实施例中，靶细胞是体外的。在一些实施例中，靶细胞存在于受试者体内。在一些实施例中，靶细胞选自由以下项组成的列表：神经元、巨噬细胞、小胶质细胞、t-细胞、b-细胞、树突状细胞、抗原呈递细胞、nk细胞、癌细胞、肌肉细胞、肝细胞、光感受器、胰岛素β细胞、肾细胞和肺细胞。在一些实施例中，受试者是人。在一些实施例中，靶细胞是人靶细胞。83、本发明还提供了根据本发明的病毒颗粒或根据本发明的药物组合物，其用作药物。本发明还提供了治疗有此需要的患者的方法，其包括施用治疗有效量的根据本发明的病毒颗粒或根据本发明的药物组合物。84、本发明还提供了根据本发明的病毒颗粒或根据本发明的药物组合物，其在治疗有此需要的受试者的疾病的方法中使用，该方法包括通过使靶细胞与病毒颗粒接触来将目的核酸序列递送至靶细胞。本发明还提供了在治疗有此需要的受试者的疾病的方法，其包括通过施用治疗有效量的根据本发明的病毒颗粒或根据本发明的药物组合物来将目的核酸序列递送至靶细胞，从而使靶细胞与病毒颗粒接触。85、在一些实施例中，疾病选自由以下项组成的列表：86、神经退行性疾病、癌症、杜氏肌营养不良、血友病、先天性失明障碍、糖尿病、囊性纤维化、无脉络膜症、a型血友病、b型血友病、cln7病、庞贝病、帕金森病、卡纳万病、脱髓鞘疾病、rpe65突变导致的遗传性视网膜营养不良、芳香族l-氨基酸脱羧酶(aadc)缺乏、x连锁色素性视网膜炎、莱伯先天性黑内障、查尔格-施特劳斯综合征(css)、严重肢体缺血、全色盲、阿尔茨海默病、黄斑变性、鸟氨酸转氨甲酰基酶缺乏症、威尔逊病、ia型糖原储存病、克里格勒纳贾尔综合征、泰-萨二氏病、桑霍夫病、多发性骨髓瘤、多系统萎缩症、神经节脂质沉积症、达农病、法布里病、贝敦氏病、苯丙酮尿症、类风湿性关节炎、iiia型粘多糖贮积症、桑菲利波综合症b、vi型粘多糖贮积症、α1-抗胰蛋白酶缺乏症、1型脊髓性肌萎缩症、克拉伯病、贝克尔肌营养不良症、1a型夏科-玛丽-图斯特神经病、肉毒碱棕榈酰转移酶ii(cpt ii)缺乏症和三甲胺尿症、囊性纤维化、苯丙酮尿症。87、在本发明的一些实施例中，本发明的病毒颗粒或组合物在治疗有此需要的受试者的疾病的方法中使用，该方法包括通过使靶细胞与病毒颗粒接触来将目的核酸序列递送至靶细胞，其中特定靶细胞的靶向根据以下列表治疗或改善特定疾病：88、用于治疗神经退行性疾病的神经元；89、用于治疗癌症的免疫细胞(例如巨噬细胞、小胶质细胞、t-细胞、b-细胞、树突状细胞、抗原呈递细胞、nk细胞)；90、免疫细胞(例如巨噬细胞、小胶质细胞、t-细胞、b-细胞、树突状细胞、抗原呈递细胞、nk细胞)以引发免疫反应；91、用于治疗癌症的癌细胞或肿瘤细胞；92、用于治疗杜氏肌营养不良症的肌肉细胞；93、用于治疗血友病的肝细胞；94、用于治疗先天性失明障碍的感光细胞；95、用于治疗糖尿病的胰岛素β细胞；或者96、用于治疗囊性纤维化的肺细胞。97、在一些实施例中，病毒颗粒或药物组合物通过气雾剂(例如，肺细胞)、肌内、动脉内(例如经由肝动脉)、关节内、视网膜下、颅内、静脉内、鞘内、冠状动脉内或皮下来向受试者施用。98、在本发明的一些实施例中，配体可以由序列特异性rna结合分子(诸如，cas13分子)组成。这将使病毒对在其表面表达靶rna的细胞具有向性。具体地，在这种情况下，衔接子分子将由cas13与pkd2结构域的一部分或全长的融合组成。然后，cas13可以与适合cas13的单个指导rna(sgrna)形成复合物，使其能够结合与sgrna原型间隔区互补的rna。99、在本发明的一些实施例中，产生病毒衔接子蛋白的方法包括提供病毒衣壳蛋白并使其与对靶细胞具有高特异性的靶向分子反应。该反应可以使用nhs或马来酰亚胺化学品进行，或者通过在病毒衣壳分子的特定位置处将非常规氨基酸与活性基团(诸如，叠氮化物、或炔烃、或四嗪、或反式环辛烯)结合来实现。在本发明的一些实施例中，病毒衔接子蛋白包含病毒衣壳蛋白和对靶细胞具有高特异性的靶向分子。100、在一些实施例中，病毒衣壳分子与能够与靶向分子结合的特定肽序列(诸如，割接内含肽(split intein)、spytag、四半胱氨酸fcm基序(flnccpgccmep)或ybbr基序(tvldslefiaskla))组合。101、然后可以选择靶向分子来与特定受体结合。在一些实施例中，靶向分子可以是蛋白质，例如针对靶细胞类型上表达的受体的抗体。102、在一些实施例中，靶向分子可以是小分子。例如，通过将诸如血清素或多巴胺的神经递质附着到病毒衣壳蛋白，就有可能创建一种在与病毒颗粒组合时将产生分别表达血清素或多巴胺受体的细胞特异的病毒颗粒的衔接子分子。103、在一些实施例中，aav颗粒可以与多于一个根据本发明的经分离的多肽或aav衔接子分子结合。在一些实施例中，aav颗粒可以与2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个或更多个根据本发明的不同的经分离的多肽或不同的aav衔接子分子结合。在一些实施例中，aav颗粒可以与2个根据本发明的不同的经分离的多肽或不同的aav衔接子分子结合。在一些实施例中，aav颗粒可以与3个根据本发明的不同的经分离的多肽或不同的aav衔接子分子结合。在一些实施例中，aav颗粒可以与4个根据本发明的不同的经分离的多肽或不同的aav衔接子分子结合。在一些实施例中，aav颗粒可以与5个根据本发明的不同的经分离的多肽或不同的aav衔接子分子结合。这样的实施例提供了针对多种不同细胞类型的特异性。例如，可以通过将单个aav颗粒与衔接子分子混合物相结合来制定基于aav的单一基因疗法，从而靶向cd4+和cd8+t细胞谱系两者，其中一些衔接子分子对cd4具有特异性，而另一些衔接子分子则对cd8具有特异性。104、在一些实施例中，病毒颗粒可以与多于一个根据本发明的经分离的多肽或病毒衔接子分子共价结合。在一些实施例中，病毒颗粒可以与2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个或更多个不同的根据本发明的经分离的多肽或不同的病毒衔接子分子共价结合。在一些实施例中，病毒颗粒可以与2个不同的根据本发明的经分离的多肽或不同的病毒衔接子分子共价结合。在一些实施例中，病毒颗粒可以与3个不同的根据本发明的经分离的多肽或不同的病毒衔接子分子共价结合。在一些实施例中，病毒颗粒可以与4个不同的根据本发明的经分离的多肽或不同的病毒衔接子分子共价结合。在一些实施例中，病毒颗粒可以与5个不同的根据本发明的经分离的多肽或不同的病毒衔接子分子共价结合。这样的实施例提供了针对多种不同细胞类型的特异性。例如，可以通过将单个病毒颗粒与衔接子分子混合物相结合来制定单一病毒基因疗法，从而靶向cd4+和cd8+t细胞谱系两者，其中一些衔接子分子对cd4具有特异性，而另一些衔接子分子则对cd8具有特异性。105、在一些实施例中，aav颗粒可以与多于一个根据本发明的经分离的多肽或aav衔接子分子结合。在一些实施例中，aav颗粒可以与2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个或更多个根据本发明的不同的经分离的多肽或不同的aav衔接子分子结合。在一些实施例中，aav颗粒可以与2个根据本发明的不同的经分离的多肽或不同的aav衔接子分子结合。在一些实施例中，aav颗粒可以与3个根据本发明的不同的经分离的多肽或不同的aav衔接子分子结合。在一些实施例中，aav颗粒可以与4个根据本发明的不同的经分离的多肽或不同的aav衔接子分子结合。在一些实施例中，aav颗粒可以与5个根据本发明的不同的经分离的多肽或不同的aav衔接子分子结合。这样的实施例提供了针对多种不同细胞类型的特异性。例如，可以通过将单个aav颗粒与衔接子分子混合物相结合来制定单一aav基因疗法，从而靶向cd4+和cd8+t细胞谱系两者，其中一些衔接子分子对cd4具有特异性，而另一些衔接子分子则对cd8具有特异性。106、在一些实施例中，本发明的经分离的多肽或病毒衔接子分子包含cd4特异性设计型锚定重复序列蛋白(darpin)的至少一部分，如在以下项中所描述的：schweizer a,rusert p,berlinger l,ruprecht cr,mann a,corthésy s等人(2008)cd4-specificdesigned ankyrin repeat proteins are novel potent hiv entry inhibitors withunique characteristics.plos pathog 4(7):e1000109。在一些实施例中，本发明的经分离的多肽或病毒衔接子分子包含cd4特异性设计型锚定重复序列蛋白(darpin)的全长，如在以下项中所描述的：schweizer a,rusert p,berlinger l,ruprecht cr,mann a,corthésy s等人(2008)cd4-specific designed ankyrin repeat proteins are novel potenthiv entry inhibitors with unique characteristics.plos pathog 4(7):e1000109。107、在本发明的一些实施例中，本发明的经分离的多肽或病毒衔接子分子包含能够结合病毒衣壳的任何合适的抗体样蛋白的至少一部分(kondo t等人，antibody-likeproteins that capture and neutralize sars-cov-2.sci adv.2020年10月14日；6(42):eabd3916)。在本发明的一些实施例中，本发明的经分离的多肽或病毒衔接子分子包含能够结合病毒衣壳的任何合适的抗体样蛋白的全长蛋白。108、在本发明的一些实施例中，本发明的经分离的多肽或病毒衔接子分子包含能够结合病毒衣壳的衍生自脂质运载蛋白折叠体的蛋白质的至少一部分(beste等人，smallantibody-like proteins with prescribed ligand specificities derived from thelipocalin fold,pnas1999年3月2日96(5)1898-1903)。在本发明的一些实施例中，本发明的经分离的多肽或病毒衔接子分子包含能够结合病毒衣壳的衍生自脂质运载蛋白折叠体的全长蛋白质。109、在本发明的一些实施例中，本发明的经分离的多肽或病毒衔接子分子包含能够结合病毒衣壳的衍生自蛋白a的z结构域的亲和体的至少一部分(nord等人，bindingproteins selected from combinatorial libraries of anα-helical bacterialreceptor domain,nature biotechnology,第15卷,第772-777页(1997))。在本发明的一些实施例中，本发明的经分离的多肽或病毒衔接子分子包含能够结合病毒衣壳的衍生自蛋白a的z结构域的全长亲和体。110、在本发明的一些实施例中，本发明的经分离的多肽或病毒衔接子分子包含能够结合病毒衣壳的纤连蛋白的结构域的至少一部分(koide等人，the fibronectin type iiidomain as a scaffold for novel binding proteins,journal of molecular biology,第284卷,第4期,1998,第1141-1151页)。在本发明的一些实施例中，本发明的经分离的多肽或病毒衔接子分子包含能够结合病毒衣壳的纤连蛋白结构域的全长序列。111、在本发明的一些实施例中，本发明的经分离的多肽或病毒衔接子分子包含能够结合病毒衣壳的fyn的sh3结构域的至少一部分(grabulovski等人，anovel,non-immunogenicfyn sh3-derived binding protein with tumor vascular targeting properties,journal of biological chemistry,第282卷,第5期,2007,第3196-3204页)。在本发明的一些实施例中，本发明的经分离的多肽或病毒衔接子分子包含能够结合病毒衣壳的fyn的sh3结构域的全长序列。112、在本发明的一些实施例中，本发明的经分离的多肽或病毒衔接子分子包含能够结合病毒衣壳的衍生自蛋白酶抑制剂stefin a的affimer或支架的衍生物的至少一部分(woodman r,yeh jt,laurenson s,ko ferrigno p.design and validation of aneutral protein scaffold for the presentation of peptide aptamers.j molbiol.2005年10月7日；352(5):1118-33)。在本发明的一些实施例中，本发明的经分离的多肽或病毒衔接子分子包含能够结合病毒衣壳的衍生自蛋白酶抑制剂stefin a的affimer或支架的衍生物的全长序列。113、在本发明的一些实施例中，本发明的经分离的多肽或病毒衔接子分子包含能够结合病毒衣壳的非抗体支架蛋白(adhiron)的至少一部分(tiede等人，adhiron:a stableand versatile peptide display scaffold for molecular recognitionapplications,protein eng des sel.2014年5月；27(5):145-155)。在本发明的一些实施例中，本发明的经分离的多肽或病毒衔接子分子包含能够结合病毒衣壳的非抗体支架蛋白(adhiron)的全长序列。114、在一些实施例中，能够与腺相关病毒(aav)衣壳结合的经分离的多肽、或包含能够与腺相关病毒(aav)衣壳结合的经分离的多肽以及配体的aav衔接子分子包含增加经分离的多肽或衔接子分子溶解度的一个或多个点突变，例如增加经分离的多肽或衔接子分子溶解度的1个、2个、3个、4个、5个或更多个点突变。115、在一些实施例中，包含能够与病毒衣壳共价结合的一个或多个半胱氨酸残基的经分离的多肽、或包含含能够与病毒衣壳共价结合的一个或多个半胱氨酸残基的经分离的多肽以及配体的病毒衔接子分子包含增加经分离的多肽或衔接子分子溶解度的一个或多个点突变，例如增加经分离的多肽或衔接子分子溶解度的1个、2个、3个、4个、5个或更多个点突变。116、在一些实施例中，能够与腺相关病毒(aav)衣壳结合的经分离的多肽、或包含能够与腺相关病毒(aav)衣壳结合的经分离的多肽以及配体的aav衔接子分子包含增加经分离的多肽或衔接子分子在细菌和/或哺乳动物系统中的蛋白质表达和/或纯化的产量的一个或多个点突变，例如增加经分离的多肽或衔接子分子在细菌和/或哺乳动物系统中的蛋白质表达和/或纯化的产量的1个、2个、3个、4个、5个或更多个点突变。117、在一些实施例中，能够与腺相关病毒(aav)衣壳结合的经分离的多肽、或包含能够与腺相关病毒(aav)衣壳结合的经分离的多肽以及配体的aav衔接子分子包含含增加经分离的多肽或衔接子分子溶解度的一个或多个点突变的aavr的pkd2结构域，例如增加经分离的多肽或衔接子分子溶解度的1个、2个、3个、4个、5个或更多个点突变。118、在一些实施例中，能够与腺相关病毒(aav)衣壳结合的经分离的多肽、或包含能够与腺相关病毒(aav)衣壳结合的经分离的多肽以及配体的aav衔接子分子包含含增加经分离的多肽或衔接子分子在细菌和/或哺乳动物系统中的蛋白质表达和/或纯化的产量的一个或多个点突变的aavr的pkd2结构域，例如增加经分离的多肽或衔接子分子在细菌和/或哺乳动物系统中的蛋白质表达和/或纯化的产量的1个、2个、3个、4个、5个或更多个点突变。119、本发明的一个具体优点是，通过使用aav结合蛋白作为衔接子分子的一部分，可以基本上改变aav的向性，而不损失重组aav载体包装到病毒衣壳中的效率，特别是对低易感性细胞的感染性可以提高数倍、或对高易感性细胞的感染性可以降低数倍。因此，本发明特别适合于改善特定细胞的体外和体内转导，例如用于体细胞基因疗法。120、在一些实施例中，包含能够与病毒衣壳共价结合的一个或多个半胱氨酸残基的经分离的多肽、或包含含能够与病毒衣壳共价结合的一个或多个半胱氨酸残基的经分离的多肽以及配体的病毒衔接子分子包含增加经分离的多肽或衔接子分子在细菌和/或哺乳动物系统中的蛋白质表达和/或纯化的产量的一个或多个点突变，例如增加经分离的多肽或衔接子分子在细菌和/或哺乳动物系统中的蛋白质表达和/或纯化的产量的1个、2个、3个、4个、5个或更多个点突变。121、在一些实施例中，包含能够与病毒衣壳共价结合的一个或多个半胱氨酸残基的经分离的多肽、或包含含能够与病毒衣壳共价结合的一个或多个半胱氨酸残基的经分离的多肽以及配体的病毒衔接子分子包含含增加经分离的多肽或衔接子分子溶解度的一个或多个点突变的aavr的pkd2结构域，例如增加经分离的多肽或衔接子分子溶解度的1个、2个、3个、4个、5个或更多个点突变。122、在一些实施例中，包含能够与病毒衣壳共价结合的一个或多个半胱氨酸残基的经分离的多肽、或包含含能够与病毒衣壳共价结合的一个或多个半胱氨酸残基的经分离的多肽以及配体的病毒衔接子分子包含增加经分离的多肽或衔接子分子在细菌和/或哺乳动物系统中的蛋白质表达和/或纯化的产量的一个或多个点突变的aavr的pkd2结构域，例如增加经分离的多肽或衔接子分子在细菌和/或哺乳动物系统中的蛋白质表达和/或纯化的产量的1个、2个、3个、4个、5个或更多个点突变。123、在本发明的一些实施例中，根据本发明的经分离的多肽、aav衔接子分子或共价结合病毒衔接子分子可以在还原剂存在下与aav颗粒、aav衣壳、病毒颗粒或病毒衣壳结合。在本发明的一些实施例中，还原剂是三(2-羰基乙基)磷盐酸盐(tcep)。在本发明的一些实施例中，根据本发明的经分离的多肽、aav衔接子分子或共价结合病毒衔接子分子可以在偶联反应之前被部分氧化。在本发明的一些实施例中，根据本发明的aav颗粒、aav衣壳、病毒颗粒或病毒衣壳可以在偶联反应之前被部分氧化。在本发明的一些实施例中，根据本发明的经分离的多肽、aav衔接子分子或共价结合病毒衔接子分子和根据本发明的aav颗粒、aav衣壳、病毒颗粒或病毒衣壳可以在偶联反应之前被部分氧化。124、在本发明的一些实施例中，根据本发明的部分氧化的经分离的多肽、aav衔接子分子或共价结合病毒衔接子分子可以在存在还原剂的条件下与aav颗粒、aav衣壳、病毒颗粒或病毒衣壳结合。在本发明的一些实施例中，根据本发明的经分离的多肽、aav衔接子分子或共价结合病毒衔接子分子可以在存在还原剂的条件下与部分氧化的aav颗粒、aav衣壳、病毒颗粒或病毒衣壳结合。在本发明的一些实施例中，根据本发明的部分氧化的经分离的多肽、aav衔接子分子或共价结合病毒衔接子分子可以在存在还原性的条件下与部分氧化的aav颗粒、aav衣壳、病毒颗粒或病毒衣壳结合。在本发明的一些实施例中，还原剂是三(2-羰基乙基)磷盐酸盐(tcep)。125、在本发明的一些实施例中，“病毒颗粒”或“aav颗粒”可以是病毒样颗粒。在本发明的一些实施例中，“病毒颗粒”或“aav颗粒”可以是衣壳蛋白重组表达后体外组装的病毒样颗粒。在本发明的一些实施例中，“病毒颗粒”或“aav颗粒”可以是在细胞表达系统中体内组装的病毒样颗粒。在本发明的一些实施例中，细胞表达系统可以是细菌(例如，大肠杆菌)、酵母(例如，酿酒酵母)、植物、昆虫(例如，粉夜蛾)或哺乳动物(例如，人)细胞表达系统。126、本发明的一个具体优点是，通过使用能够与病毒衣壳共价结合的结合蛋白作为衔接子分子的一部分，可以基本上改变病毒的向性，而不损失重组载体包装到病毒衣壳中的效率，特别是对低易感性细胞的感染性可以提高数倍、或对高易感性细胞的感染性可以降低数倍。因此，本发明特别适合于改善特定细胞的体外和体内转导，例如用于体细胞基因疗法。127、在本文所描述的本发明的任何实施例中，能够与病毒衣壳结合的经分离的多肽、或包含能够与病毒衣壳结合的经分离的多肽以及配体的病毒衔接子分子(“病毒衔接子分子”)可以是能够与病毒衣壳共价结合的。上述涉及经分离的多肽与病毒衣壳非共价结合的任何陈述经必要修改后适用于能够与病毒衣壳共价结合的经分离的多肽。本文描述了涉及经分离的多肽或病毒衔接子分子与病毒衣壳共价结合的具体实施例。当前第1页12当前第1页12