细胞剥离方法，细胞剥离系统及信息处理装置与流程

本发明涉及细胞剥离方法、细胞剥离系统及信息处理装置。

背景技术：

1、近年来，关于药物开发，已经进行了如下的大范式转变：从相关领域中的小分子量药物和抗体药物向利用细胞本身作为药物的细胞医疗和意图实现组织和器官的再生的再生医疗。关于细胞医疗和再生医疗，需要大量的细胞，并且期望高效稳定地供应占据生物组织大部分的附着性细胞。

2、在附着性细胞的培养中，通过在培养基材例如聚苯乙烯盘上培养细胞、从基材剥离细胞、和回收并清洗细胞的各步骤获得目标细胞。当希望进一步生长细胞时，进行所谓的传代操作，其中将所获得的细胞的一部分转移到新的基材上并进行培养。关于在一系列步骤中将细胞从基材剥离的剥离步骤，已进行了高效、稳定的细胞供应的研究。

3、一般而言，蛋白分解酶例如胰蛋白酶被广泛用于剥离细胞。在该方法中，参与细胞和基材之间结合的蛋白质通过蛋白分解酶的作用被分解，并此后通过诸如轻敲或移液的操作将细胞完全剥离。然而，根据该方法，许多细胞表面蛋白质同时被蛋白分解酶分解，并且存在细胞品质可能劣化的顾虑。另外，由于诸如轻敲或移液的操作会根据人员的熟练水平而显著改变，因此存在涉及稳定供应的问题。

4、引用列表

5、专利文献

6、专利文献1:国际公开号2016/047368

7、专利文献2:日本专利公开号2003-235540

8、专利文献3:国际公开号2007/136073

技术实现思路

1、技术问题

2、关于上述问题，存在一种不使用蛋白分解酶从培养容器剥离细胞的已知方法。专利文献1提出了一种将超声波区域选择性地照射到细胞上以使细胞从容器剥离的方法。然而，没有公开确定施加超声波的时机的方法。

3、关于细胞培养，专利文献2和专利文献3公开了获取细胞面积、细胞图像亮度等信息并确定细胞是否被剥离的方法或装置。然而，没有公开获取附着状态的细胞的细胞信息以及确定施加超声波的时机的方法。

4、问题的解决方案

5、在现有技术中的通过使用超声波的附着细胞剥离方法中，细胞保持附着于基材，从而必须在一些时机施加超声波，这与通过使用由胰蛋白酶为代表的蛋白分解酶的剥离方法截然不同。在这方面，当通过使用细胞剥离液对细胞的处理时间增加时，细胞可能受到损伤从而引起与此后细胞培养相关的问题。因此，有必要在适当的时机进行使用超声波的细胞剥离步骤。然而，关于通过使用超声波的附着细胞剥离方法，迄今为止尚未发现用于确定是否施加超声波的超声波施加确定方法。

6、也就是说，关于现有技术中通过使用超声波的附着细胞剥离方法，由于上述原因，存在当细胞或培养条件变化时细胞剥离无法被限制为稳定的顾虑。

7、本说明书中公开的细胞剥离方法是一种通过向附着于基材的细胞施加振动来使细胞从基材剥离的细胞剥离方法，该方法包括：在使实质上不含蛋白分解酶的细胞剥离液与细胞接触之后孵育细胞的孵育步骤(incubation step)；获取与孵育的细胞相关的信息的信息获取步骤；根据与细胞相关的信息来确定对孵育的细胞施加振动的时间的确定步骤；和对孵育的细胞施加振动的剥离步骤。

8、本说明书中公开的细胞剥离系统是一种通过向附着于基材的细胞施加振动以使细胞从基材剥离的细胞剥离系统，该系统包括：在使实质上不含蛋白分解酶的细胞剥离液与细胞接触之后孵育细胞的孵育部；获取与孵育的细胞相关的信息的信息获取部；根据与细胞相关的信息来确定对孵育的细胞施加振动的时间的确定部；和对孵育的细胞施加振动的剥离部。

9、本说明书中公开的信息处理装置是一种通过向附着于基材的细胞施加振动来控制细胞剥离装置以便从基材剥离细胞的信息处理装置，该信息处理装置包括：获取与实质上不含蛋白分解酶的细胞剥离液接触的细胞相关的信息的信息获取部，以及根据与细胞相关的信息来确定向细胞施加振动的时间的确定部。

10、发明效果

11、根据本发明，可提供一种细胞剥离方法，其中细胞存活率高，并且细胞剥离效率稳定，而不管细胞或培养条件如何变化。

技术特征：

1.一种通过向附着于基材的细胞施加振动来将细胞从基材剥离的细胞剥离方法，该方法包括：

2.根据权利要求1所述的细胞剥离方法，其中所述振动是超声波段中的振动。

3.根据权利要求1所述的细胞剥离方法，其中所述细胞剥离液含有金属离子螯合剂。

4.根据权利要求1所述的细胞剥离方法，其中所述细胞剥离液含有聚乙二醇。

5.根据权利要求1所述的细胞剥离方法，其中所述孵育步骤在37℃的环境中进行。

6.根据权利要求1所述的细胞剥离方法，

7.根据权利要求6所述的细胞剥离方法，其中所述亮度值是通过斜入射照明观察的基材的细胞培养表面的亮度值。

8.一种程序，其使计算机执行根据权利要求1至7中任一项的细胞剥离方法。

9.一种通过向附着于基材的细胞施加振动来将细胞从基材剥离的细胞剥离系统，该系统包含：

10.一种用于控制细胞剥离装置以通过向附着于基材的细胞施加振动来将细胞从基材剥离的信息处理装置，所述信息处理装置包括：

技术总结一种通过向附着于基材的细胞施加振动来将细胞从基材剥离的细胞剥离方法，该方法包括：在使实质上不含蛋白分解酶的细胞剥离液与细胞接触之后孵育细胞的孵育步骤；获取与孵育的细胞相关的信息的信息获取步骤；根据与细胞相关的信息来确定向孵育的细胞施加振动的时间的确定步骤；和向孵育的细胞施加振动的剥离步骤。技术研发人员：山内文生,金崎健吾,望月信介,椿圭一郎,加藤舞,古井贵昭,吉田亮一受保护的技术使用者：佳能株式会社技术研发日：技术公布日：2024/9/12